高效液相色譜是目前應(yīng)用較多的色譜分析方法，高效液相色譜系統(tǒng)由流動(dòng)相儲(chǔ)液體瓶、輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器和記錄器組成，其整體組成類似于氣相色譜，但是針對(duì)其流動(dòng)相為液體的特點(diǎn)作出很多調(diào)整。HPLC的輸液泵要求輸液量恒定平穩(wěn);進(jìn)樣系統(tǒng)要求進(jìn)樣便利切換嚴(yán)密;由于液體流動(dòng)相粘度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于氣體，為了減低柱壓高效液相色譜的色譜柱一般比較粗，長(zhǎng)度也遠(yuǎn)小于氣相色譜柱。

    和其它分析儀器一樣，你若想讓HPLC很好地為你工作、得到可靠的數(shù)據(jù)，首先你要保養(yǎng)好它，使它處于一個(gè)良好的待機(jī)狀態(tài)，這樣你操作它進(jìn)行分析時(shí)就可以比較順利地獲得理想的結(jié)果。而且良好規(guī)范的操作習(xí)慣可以延長(zhǎng)儀器使用壽命。HPLC日常操作注意事項(xiàng)：

1、選擇流動(dòng)相時(shí)應(yīng)注意的幾個(gè)問題：

• 盡量使用高純度試劑作流動(dòng)相，防止微量雜質(zhì)長(zhǎng)期累積損壞色譜柱和使檢測(cè)器噪聲增加。

• 避免流動(dòng)相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降或損壞柱子。

• 試樣在流動(dòng)相中應(yīng)有適宜的溶解度，防止產(chǎn)生沉淀并在柱中沉積。

• 流動(dòng)相同時(shí)還應(yīng)滿足檢測(cè)器的要求。當(dāng)使用紫外檢測(cè)器時(shí)，流動(dòng)相不應(yīng)有較強(qiáng)的紫外吸收，一般檢測(cè)波長(zhǎng)應(yīng)大于流動(dòng)相的截止波長(zhǎng)。

 

 

2、泵的維護(hù)保養(yǎng)：

•  防止任何固體微粒進(jìn)入泵體，否則會(huì)磨損柱塞、密封環(huán)缸體和單向閥，因此應(yīng)預(yù)先對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行過濾，可采用Millipore濾膜(0．22μm或 0．45μm )等過濾。泵的入口都應(yīng)該連接砂濾棒(或片)， 輸液泵的濾器應(yīng)經(jīng)常更換。

• 流動(dòng)相不應(yīng)含有任何腐蝕性物質(zhì)， 含有緩沖液的流動(dòng)相不應(yīng)保留在泵內(nèi)， 尤其是停泵過夜或更長(zhǎng)時(shí)間。分析工作結(jié)束后必須用純水充分清洗后，再換成適合于色譜柱保存和有利于泵維護(hù)的溶劑(對(duì)于反相鍵合固定相，可以是甲醇或甲醇和水)

• 泵工作時(shí)要留心防止溶劑瓶?jī)?nèi)的流動(dòng)相用完，否則空泵運(yùn)轉(zhuǎn)也會(huì)磨損柱塞、密封環(huán)或缸體，終產(chǎn)生漏液。

• 輸液泵的工作壓力不要超過規(guī)定的高壓力，否則會(huì)使高壓密封環(huán)變形，產(chǎn)生漏液。

 

3、紫外檢測(cè)器維護(hù)保養(yǎng)：

• 流通池進(jìn)入氣泡會(huì)干擾基線，并極難排出，應(yīng)使用充分脫氣的流動(dòng)相，以減少氣泡的產(chǎn)生。

• 應(yīng)定期沖洗系統(tǒng)，避免流通池干涸。

• 檢測(cè)器中氘燈( 光源) 隨著使用時(shí)間的增加，氘燈強(qiáng)度降低，噪音會(huì)不斷增大，故分析前柱平衡得差不多時(shí)，再打開檢測(cè)器，分析工作結(jié)束及時(shí)關(guān)閉檢測(cè)器（頻繁開關(guān)檢測(cè)器也會(huì)縮短檢測(cè)器壽命，一般開啟間隔少于4小時(shí)，不建議關(guān)閉檢測(cè)器）。 

• 塵埃在靜電的作用下容易覆蓋在光學(xué)元件上， 使光傳播效率降低，增加了光散射， 影響分析效果， 因此檢測(cè)器周圍的環(huán)境應(yīng)保持清潔。